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技术文章/ARTICLE

上海岑特详细讲述：肿瘤坏死因子ELISA试剂盒的细节处理

点击次数：736 发布时间：2017/7/10 13:44:52

   肿瘤坏死因子elisa试剂盒的细节处理

    由于肿瘤坏死因子ELISA试剂盒只能检测可溶性蛋白的含量，所以应保证所有样本均为澄清的液体，沉淀或悬浮物都应离心去除。为了保证检测的准确性，保存于-20℃或-80℃的样本在1~6个月内检测；4℃保存的样本应在1周内进行检测。另外，还应保证样本不含NaN3，因为NaN3会抑制HRP的活性，从而导致假阴性的结果。

    细胞裂解液的细节处理：

    1.吸去培养板内的培养基，用胰酶消化细胞，加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略。

    2.收集细胞悬液，1000×g离心10min，弃去培养基，用预冷的PBS润洗3次。

    3.加入适量的预冷PBS或细胞裂解液(临用前加入蛋白酶抑制剂)重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μLPBS重悬。

    4.将样品放入-20℃或-80℃，使样品冷冻，再放室温解冻样品，反复冻融几次，使细胞充分裂解。也可将样品进行超声破碎，以达到裂解的目的。

    5.4℃10000×g离心10min，除去细胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

    肿瘤坏死因子ELISA试剂盒组织匀浆液的细节处理：

    1.将组织样本用PBS(0.01M,PH7.4)冲洗，洗去组织表面残留的血液或杂质。

    2.将组织块称重，记录后剪碎，碎块应尽量小，便于匀浆得更充分

    3.将组织按一定的比例加入预冷的PBS(临用前加入蛋白酶抑制剂)匀浆，匀浆时置于冰上或冰浴中。

    4.吸取匀浆液到离心管，4℃5000×g离心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。