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技术文章/ARTICLE

ELISA实验背景深全部呈有色原因及解决办法

点击次数：644 发布时间：2020/3/9 14:33:51

ELISA试剂盒在国内有许多种叫法，例如：ELISA检测试剂盒、ELISA Kit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、酶免试剂盒等，比较常见的叫法是ELISA检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等。

elisa试剂盒实验中，背景深，全部呈有色（通常的Elisa背景值OD<0.2）

根据技术分析，可能存在的原因有一下几条：

1、实验过程中洗涤不充分，洗后未拍干，样品中其它成分残留或酶标记物残留
解决办法：洗液准确配制；充分洗涤，静置15秒，彻底拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用，不要反复使用，否则易造成污染。

2、底物污染，未避光保存，出现颜色
解决办法：弃去底物，重新配置

3、样品稀释液污染
解决办法：弃去稀释液，重新配置

4、吸头重复使用，未洗净或消毒不彻底
解决办法：吸头尽可能一次性使用

5、没有正确封闭
解决办法：在标准品稀释液中加入动物蛋白或延长封闭时间

6、样本溶血严重
解决办法：建议使用非溶血或轻微溶血样本，严重溶血样本会导致背景偏高。

7、不正确的孵育时间，温度（尤其是底物孵育的时间）
解决办法：zui为常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。完全按照说明书要求

8、偶联抗体（streptavidin-HRP）浓度过高
解决办法：按照说明书调整到合适的浓度

9、ELISA板子不正确的贮存
解决办法：酶标板贮存于2-8 ℃；使用结合力低点的Elisa板

原创作者：上海岑特生物科技有限公司