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技术文章/ARTICLE

岑特实验: 最亮的细胞转染怎么做？

点击次数：441 发布时间：2020/6/30 11:24:28

    做转染实验时小编就抱着一个信念，就是要给细胞点“颜色”看（荧光），但你知道吗？就这个简单的实验过程，小小的细胞却有着大大的能量，实验过程中带阳离子的脂质体充当着“搬运工”的角色将质粒从胞外“抓”到胞内，而细胞为质粒的复制、转录、翻译提供“场所和原材料”，自己也跟着“增光填色”,但“上色”过程中会遇到一些问题，总结下来主要有以下二个方面：

    细胞状态差

    转染效率低

    Q1：转染后细胞状态较差

    A：分析：主要是铺板和反应液配制的原因

     细胞状态是整个实验的关键，如果细胞状态不好，则转染后细胞状态当然就好不了

     铺板：过多或不均匀，细胞长的太满就会状态较差

     脂质体本身有毒性，如果脂质体加入量太多，会导致细胞状态较差，或者细胞死亡，建议在做正式实验前，先做一下预实验，摸索一下质粒和脂质体的配比。

    Q2：转染后荧光效率低

    A：分析：主要是细胞原因和“搬运”过程中的问题

     1、细胞状态仍然是重中之重，如果有一段时间转染效果很不理想，必须要换一批次细胞；

     2、加入目的质粒后轻轻混匀，太用力会破坏混合液的结构，

     3、质粒与转染试剂的比值：过高一部分质粒不能进入细胞，过低“搬运工”太多，有毒性且浪费；

     4、吸、打液体时注意枪头内液面高度，是否完全打出；

     5、反应液配好后等待20min，质粒才会被完全包裹；

     6、反应液滴加加入细胞，使“脂质体+质粒”均匀分布；

     7、质粒反复冻融影响浓度，尽量减少冻融次数；脂质体 -20℃保存，用完应马上放回；

     8、必要时需要检测一下质粒的浓度是否准确；

原创作者：上海岑特生物科技有限公司