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技术文章/ARTICLE

蛋白提取操作时应注意的细节！！！

点击次数：409 发布时间：2020/7/8 10:46:52

避免蛋白降解：

总体规则：蛋白酶普遍存在，在提取蛋白质的步骤中，早些抑制，经常抑制

分装蛋白溶液，储存于不同的温度和不同的缓冲液中，测蛋白活性，找出*适储存条件。

冷藏，并加入稳定剂。这些稳定剂一般都能充分保持蛋白的生物学活性。

将蛋白溶液储于50%（V/V)的甘油或悬于硫酸铵（3.2M）中，避免冻存

冰结晶会造成物理剪切及蛋白变性。

避免酶的反复冻融，如果酶需要冻存，分装成小管后冻存。

蛋白质的储存：

蛋白样品在液氮中速冻，拿出后加入10-20%的甘油，长期储存

整个实验过程中，都要将蛋白样品置于冰上

从母管中吸取不同的蛋白时，都要用新鲜的枪头

不要将未用的溶液倒回母管

戴手套操作，避免蛋白交叉污染，或是蛋白酶的污染

避免剧烈的震荡，避免溶液中混入蛋白变性剂

实验的过程中应避免灰尘进入，灰尘包含60%的肌氨酸

操作过程中：

操作时总是小体积小量的操作，避免污染，并且动作要快

a：此类蛋白酶在活性中心包含丝氨酸和组氨酸。

b：此类蛋白酶在活性中心包含半胱氨酸（巯基，-SH-）。

c：此类蛋白酶在活性中心包含金属离子（如：n2+，Ca2+，Mn2+）。

d：此类蛋白酶在活性中心包含天冬氨酸族。

生物试剂的使用常识：
（1）试剂切忌与手接触（有些试剂有强腐蚀性、等特性）。
（2）要用洁净的药勺，量筒或滴管取用试剂，绝对不允许用同一种工具同时连续取用多种试剂。取完一种试剂后，应将工具洗净（药勺要擦干）后，才可取用另一种试剂。
（3）试剂取用后一定要将瓶塞盖紧，不可放错瓶盖和滴管，绝不允许张冠李戴，用完后请及时将瓶放回原处，以免遗忘，带来不便。
（4）已取出的试剂不能再放回原试剂瓶内（怕产生原试剂的再次污染）。