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岑特问答：D-荧光素的一些小知识！
阅读次数：381 发布时间：2020/5/28 10:07:05
Q1: 荧光素的纯度对实验有成影响吗？
A：有影响。99%以上的纯度较好。
Q2: 甲虫荧光素和萤火虫荧光素之间有区别吗？
A：二者之间没有区别。
Q3: 如何溶解荧光素，其溶液稳定吗？
A：荧光素钾盐在水中的溶解度为60 mg/ml，荧光素钠盐溶解度为100 mg/ml。荧光素游离酸是不溶于水的，但是在甲醇中的溶解度为10 mg/ml，在DMSO中溶解度为50 mg/ml。
荧光素钠盐和钾盐的水溶液短期内存放于-80℃，对实验效果没有明显影响。有实验证明，将荧光素溶解于脱氧中的水中会更稳定些。
对于一些较为敏感的试验，为了控制试验中的可变因素，较推荐新鲜配置的反应液 。例如，低浓度的荧光素酶或者并非*适的反应条件是需要高质量的底物才能进行反应 。
Q4: 荧光素钠盐和荧光素钾盐有什么区别？
A：目前的研究没有发现二者在使用效果上的区别，仅在物理特征上有些小的差别，如荧光素钠盐溶解度会高于荧光素钾盐。但是在体内实验研究中，有更多的研究者倾向于选择荧光素钾盐，据不完全统计，选用钾盐的使用人是钠盐使用人的3倍。
Q5: 荧光素钠盐，荧光素钾盐，和荧光素游离酸之间有什么区别？
A：游离酸不溶于水，在甲醇中的溶解度为10 mg/ml，在DMSO中溶解度为50 mg/ml，同样可用NaOH，KOH弱碱去调节溶液的PH值。荧光素的钠盐或者钾盐在使用过程中会更方便，尤其是在体内成像实验中，因其能够溶解在水中，反应毒性也会更小些。
Q6: 为什么溶解荧光素钠盐或者钾盐的时候需用不含Ca2+或Mg2+离子的PBS，有无别的盐溶液可用来溶解荧光素？
A：PBS，或者其他的磷酸盐缓冲液，或DPBS，常用来进行生物学研究或者细胞相关研究。PBS/DPBS为等渗溶液，PH为7.2-7.6之间。DPBS和PBS之间无差别，只是通常情况下，DPBS是不含钙镁离子。钙镁离子可能会抑制某些蛋白酶的活性。此外Mg2+是催化荧光氧化的重要因素，Ca2+是和腔肠素氧化有关的离子。其他的盐溶液也可用来溶解荧光素，但要避免溶液中的阳离对实验造成影响。
Q7: 荧光素酶的发光特性？
A：荧光素腹腔注射老鼠后约1 min后，能够表达荧光素酶的细胞开始发光，10 min后强度达到稳定的点，在点持续约20-30 min后开始衰减，约3 h后荧光素排除，发光全部消失，的检测时间是在注射后15-35 min内。其动力学曲线如下图：
Q8: 怎么将荧光素注入小鼠体内，注射方法之间的区别是什么？
A：荧光素可通过腹腔注射或尾部静脉注射注入小鼠体内。约1 min可扩散到小鼠全身。大部分情况下使用荧光素浓度为150 mg/kg。对于20 g的小鼠约使用3 mg的荧光素即可。对于腹腔注射来讲，扩散较慢，开始发光较慢，持续发光时间较长。对于荧光素的尾部静脉注射，扩散快，开始发光快，但发光持续时间较短。
Q9: 荧光素底物可以透过血脑屏障吗？
A：荧光素底物约280道尔顿，荧光素的水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透细胞膜和血脑屏障。
Q10: 荧光素酶的表达稳定性如何？
A：通过稳定筛选等过程，荧光素酶基因是能够插到细胞染色体内的。当细胞进行分裂、转移、分化时，荧光素酶也得到持续稳定的表达，荧光素酶的半衰期约为3 h，故只有活细胞才能持续表达荧光素酶。
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