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四种酵母培养基的配方与操作步骤

上海古朵生物科技有限公司发布时间:2020/7/31 10:19:02

酵母细胞的培养专题
本文主要介绍了四种酵母培养基的配制方法与原理,主要包括麦芽汁培养基、马铃薯葡萄糖培养基、豆芽汁葡萄糖培养基和察氏培养基的制备原理和方法。具体如下:

一、目的要求

了解合成培养基、半合成培养基和天然培养基的配制原理。

学习和掌握麦芽汁培养基、马铃薯葡萄糖培养基、豆芽汁葡萄糖培养基和察氏培养基的配制方法。

二、基本原理

麦芽汁培养基和马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养酵母菌 和霉菌。马铃薯葡萄糖培养基有时也可用于培养放线菌。豆芽汁葡萄糖培养基也是培养酵母菌及霉菌的一种优良培养基。察氏培养基主要用于培养霉菌观察形态用。麦芽汁培养基为天然培养基,马铃薯葡萄糖培养基和豆芽汁葡萄糖培养基二者均为半合成培养基,而察氏培养基则为合成培养基。培养基配方中出现的自然pH系指培养基不经酸、碱调节而自然呈现的pH。

三、实验材料

(一) 药品

葡萄搪、蔗糖、NaN03、K2HP04、KCl、MgSO4·7H2O,FeS04、琼脂 。

(二) 仪器

天平、高压蒸汽灭菌锅。

(三) 玻璃器皿

移液管、试管、锥形瓶、烧杯、量筒、培养皿、玻璃漏斗等。

(四) 其他物品

药匙、pH试纸、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸、新鲜麦芽汁、黄豆芽、马铃薯等。

四、实验内容

(一) 麦芽汁培养基的配制

1.培养基成分

新鲜麦芽汁一般为10-15波林。

2.配制方法

(1) 用水将大麦或小麦洗净,用水浸泡6-12h,置于15℃阴凉处发芽,上盖纱布,每日早、中、晚淋水一次,待麦芽伸长至麦粒的两倍时,让其停止发芽,晒干或烘干,研磨成麦芽粉,贮存备用。

(2) 取一份麦芽粉加四份水,在65℃水浴锅中保温3-4h,使其自行糖化,直至糖化完全(检查方法是取0.5ml的糖化液,加2滴碘液,如无蓝色出现,即表示糖化完全)。

(3) 糖化液用4-6层纱布过滤,滤液如仍混浊,可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清,加水20 ml,调匀至生泡沫,倒入糖化液中,搅拌煮沸,再过滤)。

(4) 用波美比重计检测糖化液中糖浓度,将滤液用水稀释到10-15波林,调pH至6.4。如当地有啤酒厂,可用未经发酵,未加酒花的新鲜麦芽汁,加水稀释到 10-15波林后使用。

(5) 如配固体麦芽汁培养基时,加入2%琼脂 ,加热融化,补充失水。

(6) 分装、加塞、包扎。

(7) 高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。

(二) 马铃薯葡萄糖培养基的配制

1.培养基成分

马铃薯   20g

葡萄糖   2 g

琼脂     1.5-2g

水     100ml

自然pH

2.配制方法

(1) 配制20%马铃薯浸汁 取去皮马铃薯200g,切成小块,加水1000ml。80℃浸泡lh,用纱布过滤,然后补足失水至所需体积。100 Pa灭菌20 min。即成20%马铃薯浸汁,贮存备用。

(2) 配制时,按每100 ml马铃薯浸汁加入2g葡萄糖,加热煮沸后加入2g琼脂 ,继续加热融化并补足失水。

(3) 分装、加塞、包扎。

(4) 高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。

(三)豆芽汁葡萄糟培养基的配制

1.培养基成分

黄豆芽   10g

葡萄糖   5g

琼脂    1.5-2g

水     100ml

自然pH

2.配制方法

(1) 称新鲜黄豆芽10g,置于烧杯中,再加入100 ml水,小火煮沸30 min,用纱布过滤,补足失水,即制成10%豆芽汁。

(2) 配制时,按每100 ml10%豆芽汁加入5g葡萄糖,煮沸后加入2 g琼脂,继续加热融化,补足失水。

(3) 分装、加塞、包扎。

(4) 高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。

(四)察氏(czapck)培养基的配制

1.培养基成分

蔗糖       3g

NaN03     0.3g

K2HP04     0.1g

KCl        0.05g

MgSO4·7H2O  0.05 g

FeS04      0.001 g

琼脂      1.5-2g

蒸馏水     100ml

自然pH

2.配制方法

(1) 称量及溶化 量取所需水量约2/3左右加入到烧杯中,分别称取蔗糖、NaNO3 、K2HP04 、KCl、MgSO4。依次逐一加入水中溶解。按每100 ml培养基加入1ml 0.1%的FeS04溶液。

(2) 定容 候药品全部溶解后,将溶液倒入量筒中,加水至所需体积。

(3) 加琼脂 加入所需量琼脂,加热融化,补足失水。

(4) 分装、加塞、包扎。

(5) 高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。

注意事项:这四种培养基的配制无需用酸或者碱调节pH,灭菌20分钟足够了,时间过长容易把培养基成分破坏掉,太短了容易造成污染。

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