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荧光定量PCR耗材的使用和选择注意事项

阅读次数：360 发布时间：2022/11/14 11:46:53

高通量的96孔PCR板和8联管是在聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)中，主要作为参与扩增反应的引物、Taq DNA聚合酶、dNTP、模板核酸、Mg、缓冲液等的承载物。医疗聚丙烯（PP）材质因其高的纯净度和稳定性，能更好适应PCR反应过程中反复高低温设定，并且能够实现高温高压灭菌操作，常常被用于PCR耗材的生产。随着荧光定量PCR技术的普及，该技术被广泛用于遗传、生化、免疫、医药等域，不仅应用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究，还可用于疾病的诊断或任何有DNA，RNA的研究域。

如何正确使用96孔PCR孔板

PCR板有透明和乳白色可选，其中乳白色更适合用于顶部采集荧光信号的新型荧光定量PCR仪（如伯乐CFX系列，ABI 7500fast 以上型号， Roche 480系列），但如果荧光定量PCR仪是底部光源的，则应选择透明的。

PCR板根据裙边设计又可分为无裙边、半裙边和全裙边三种设计模式，不同厂家的荧光定量PCR仪会设计不同的切角或边缘凸起，请选择适合该PCR仪的板子。

PCR板又分100ul体积（矮板）和200ul体积（高板），根据机型的不同选择，选择不同高度孔板，避免高度错误对机器造成破坏和加热不均导致数据失真。

当使用96孔板做荧光定量PCR实验的时候，推荐使用光学膜代来密封反应孔。正确的封膜方法是：先沿着96孔板的纵向压膜，然后横向，后沿着板的边缘按压使之密封。

加样后会在管壁上飞溅一些小液滴，另外反应体系内也会有一些气泡，需要离心去掉挂壁液滴和气泡。请使用用的微孔板离心机解决上述问题。

PCR板属于一次性消耗品，生产一次成型，不建议剪开使用容易造成实验误差增加，不能清洗或部分重复利用。不要为了节省一点小钱，而给实验带来后续分析上的困扰。

样本量少，用8联管做实验又该注意哪些呢？

8联管也分乳白和透明两种，选择方式和孔板一样，根据PCR仪的荧光信号采集方式决定。

8联管同样也有0.1ml（矮管）和0.2ml（高管），根据PCR仪的加热模块体积确定。

8联管的盖子一般有光学平盖和凸型圆盖之分，光学平盖适用于荧光定量PCR，圆盖适用于普通PCR。

使用单管或8联管做实验，并且样本数量不多的时候，建议在样品加热块(TRAY)上对称地安放样品，好是纵向放置，并且优先放在第6列或第7列，然后逐渐向两边放置。这样做的好处是热盖压下来的时候不至于发生倾斜，各个反应管的受力和受热都比较均匀，提高孔与孔之间的数据精密性。也可以在加热模块四角的位置，放置4个单管平衡热盖压力，避免扩增少量样本时出现管子变形的情况。

管盖没有盖好造成PCR反应液热蒸发，影响反应温度的准确控制及反应也各成份的浓度，同时也成为一个污染源。不但会因压盖时由于粗心或者用力不均致使部分盖子变形，而且还会造成样品的交叉污染，所以我们推荐用独立管盖的8联管，每管盖一体，确保样本独立反应，避免交叉污染。