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pUC18 和 pUC19质粒图谱详细说明

阅读次数：2081 发布时间：2022/11/17 11:41:54

pUC18 和 pUC19质粒图谱

pUC18 和 pUC19 大小只有 2686bp ，是常用的质粒载体，其结构组成紧凑，几乎不含多余的 DNA 片段，GenBank注册号为 L08752(pUC18)和 X02514(pUC19)。由 pBR322 改造而来，其中 lacZ (MSC)来自 M13mp18/19 图 3-4 是其质粒图谱。

这两个质粒的结构几乎是完全一样的，只是多克隆位点的排列方向相反。这些质粒缺乏控制拷贝数的 rop 基因，因此其拷贝数达 500-700 。 pUC 系列载体含有一段 lacZ 蛋白氨基末端的部分编码序列，在特定的受体细胞中可表现 α-互补作用。因此在多克隆位点中插入了外源片段后，可通过 α-互补作用形成的蓝色和白色菌落筛选重组质粒。

特征序列区位：

&NBS p;

pBR322_origin&NBS p;1471 - 852

Ampicillin2486 - 1626

lac_promoter543 - 514

AmpR_promoter2556 - 2528

M13_pUC_rev_primer500 - 478

M13_reverse_primer479 - 461

M13_forward20_primer379 - 395

M13_pUC_fwd_primer364 - 386

lacZ_a398 - 250

pGEX_3_primer51 - 29

Orf22486 - 1626

NOS terminator sequence:

ggatccatcgttcaaacatttggcaataaagtttcttaagattgaatcctgttgccggtcttgcgatgattatcatataatttctgttgaattacgttaagcatgtaataattaacatgtaatgcatgacgttgtttatgagatgggtttttatgattagagtcccgcaattatacatttaatacacgatagaaaacaaaatatagcgcgcaaactaggataaattatcgcgcgcggtgtcatctatgttactagtaatcgat

设计引物：

Forward primer: 5’ ggaGGATCCggatccatcgttcaaac 3’ (含BamH I 位点GGATCC及三个保护碱基)

Reverse primer: 5’ atcGAATTCATCGATTACTAGTAACATAG 3’ (含EcoR I 位点GAATTC及三个保护碱基)

请查一下NOS终止子序列内有没有这两个酶切点。如果没有，引物合成后，以任何一种pCAMBIA为模板都能扩增到该终止子序列。