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什么是核蛋白？核蛋白的提取方法介绍

阅读次数：292 发布时间：2023/10/19 10:22:25

核蛋白的简介

核蛋白(nucleoprotein)因其初发现于细胞核中，故称为核蛋白，它是细胞中的一种结合蛋白质。在细胞核及细胞质中都含有核蛋白。此外，在病毒、染色体和核蛋白体中也含有核蛋白。核蛋自在生物的生长和繁殖过程中有着独特的功能和作用。

核蛋白是由带阳离子性质的碱性蛋白质(如组蛋白和鱼精蛋白)和蛋白质辅基(核酸)所构成。组蛋白含有碱性氨基酸(如赖氨酸和精氨酸)，所以具有碱性。其相对分子质量为11 000～21 000。鱼精蛋白存在于某些鱼精核蛋白中，由于富含精氨酸，因此也具有碱性。

核蛋白的提取方法

柱式法 Minute TM 胞质胞核分离试剂盒操作方法：

A．悬浮细胞样品（包括植物，细菌，酵母和真菌制备的原生质体）

1.500Xg，3 分钟低速离心收集细胞，用预冷的 PBS 清洗一次

2. 将细胞转移到 1.5 ml 离心管中，3000 rpm 离心 1-5 分钟，弃去上清。

3. 按表格 1 加入适量的胞浆提取缓冲液（请注意样品及裂解液的比例，以达到佳效果）, 涡旋大力震荡 15 , 冰上孵育 5 分钟, 混匀. 接转胞质胞核分离步骤。

B. 贴壁细胞

1. 贴壁细胞生长至融合度 90-100%，将预冷的 PBS 直接加入细胞培养板，培养皿或培养瓶中清洗细胞两次，吸去上清。

2. 按表格 2 将适量的胞浆提取缓冲液均匀的加入整个器皿表面，冰上静置 5 分钟。用吸头吹打几次后转移到预冷的 1.5 ml 离心管中。涡旋大力震荡 15 。接转胞质胞核分离步骤。（请注意样品及裂解液的比例，如浓度较低请减少裂解液使用量）

C．组织样品

1. 称重适量组织样品，放入预冷的 1.5 ml 离心管中。

2. 用预冷的 PBS 清洗组织样品一次。3000rpm 离心 1 分钟，弃去上清，尽可能的使沉淀干燥。

3. 加入适量胞浆提取缓冲液，用微型管杵或微粉碎机匀浆，去除没有完全匀浆的组织碎片。接转胞质胞核分离步骤。

胞质胞核分离步骤

1. 4oC，高速 (14000-16000 rpm) 离心 5 分钟

2. 将上清液（上清为胞浆组份）转移到一个新的预冷的 1.5 ml 离心管中。将沉淀（可选优化：用 0.5 ml 预冷 PBS 重悬，10000 rpm，离心 3-5 分钟清洗沉淀可以减少胞浆蛋白污染）中加入适量的胞核提取缓冲液，涡旋大力震荡 15 ，冰上孵育 1 分钟。

然后重复震荡 15 ，冰上孵育 1 分钟四次。（如核蛋白提取浓度低，可适当延长每次孵育及震荡时间）

3. 迅速将核提取物转入到预冷的离心管套管中，14000-16000 rpm，离心 30 。弃掉离心管柱。将核蛋白储存于-80℃。一般产量 1.5-2.5 mg/ml。